o substrato cromogênico β – D- 4- metil - umbeliferona (MUG) é usado para detectar a enzima β – D- galactosidase que é produzida apenas pelas bactérias Escherichia coli que quebra a molécula liberando 4- metil – umbeliferona, que, observada sob luz UV de 366nm, produz fluorescência azul intensa, indicando a presença de Coliformes totais.

o substrato cromogênico orto-nitrofenil – β – D- galactopiranosido (ONPG) é usado para detectar a enzima β – glucoronidase que é produzida por todas as bactérias do grupo Coliformes totais. Sob ação dessa enzima, o substrato é clivado liberando orto-nitrofenol que muda a cor do meio para amarelo intenso.

o substrato cromogênico β – D- 4- metil - umbeliferona (MUG) é usado para detectar a enzima β – glucoronidase que é produzida por todas as bactérias do grupo Coliformes totais.

o substrato cromogênico orto-nitrofenil – β – D- galactopiranosido (ONPG) é usado para detectar a enzima β – D- galactosidase que é produzida por todas as bactérias do grupo Coliformes totais. Sob ação dessa enzima, o substrato é clivado liberando ortonitrofenol que muda a cor do meio para amarelo intenso.

as análises com os substratos enzimáticos para determinação de bactérias do grupo Coliformes totais, passam por incubação em estufa a 44,5°C e, com 24 horas, faz-se a leitura de Coliformes totais, e com 48 horas, a leitura de Escherichia coli.