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É necessário confirmar se um gene de 1000 nucleotídeos está corretamente clonado num plasmídeo que, vazio, apresenta 5000 nucleotídeos. O gene foi inserido usando as enzimas de restrição NdeI e BamHI. Decidiu-se usar as enzimas PvuI e EcoRI para verificar a clonagem. Considere o mapa de restrição a seguir:
Mapa de restrição do Plasmídeo vazio 5000 pb:
| Enzima | Número de sítios | Localização |
| Ndel | 1 | 200 |
| BamHl | 1 | 400 |
| EcoRI | 1 | 100 |
| Pvul | 0 | - |
Mapa de restrição do gene 1000 pb:
| Enzima | Número de sítios | Localização |
| Ndel | 1 | 1 |
| BamHl | 1 | 1000 |
| EcoRI | 0 | - |
| Pvul | 1 | 500 |
Assinale a alternativa que apresenta o resultado previsto para uma clonagem bem sucedida.
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Sobre PCR em tempo real, é correto afirmar que:
I- Caso se queira determinar os níveis de expressão de determinado transcrito é necessário o uso de genes constitutivos ou “housekeeping”;
II- Esta técnica oferece a limitação de analisar apenas DNA, não podendo ser usado como ferramenta para análise da expressão de genes;
III- Apesar de ser mais simples e barata do que a técnica de “northern blot” ainda necessita do uso de isótopos radioativos.
Assinale a alternativa que apresenta a(s) afirmativa(s) correta(s).
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