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Em um projeto de prospecção de fungos com o objetivo de produção enzimática, obteve-se uma condição de cultivo adequada ao aumento de secreção da enzima de interesse. Foram utilizados métodos de análise para identificação e quantificação de tal enzima no meio de cultivo. A identificação foi feita por digestão da enzima e sequenciamento dos peptídios, mediante espectrometria de massa. A massa molecular média da enzima foi determinada como 55 kDa.
Considerando essa situação hipotética, julgue os próximos itens.
A injeção de uma mistura de peptídios trípticos dessa enzima, em um sistema cromatográfico de fase reversa acoplado a um espectrômetro de massa com analisadores do tipo quadrupolo e tempo de voo, fornece dados suficientes para a identificação da enzima em um banco de dados.
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Em um projeto de prospecção de fungos com o objetivo de produção enzimática, obteve-se uma condição de cultivo adequada ao aumento de secreção da enzima de interesse. Foram utilizados métodos de análise para identificação e quantificação de tal enzima no meio de cultivo. A identificação foi feita por digestão da enzima e sequenciamento dos peptídios, mediante espectrometria de massa. A massa molecular média da enzima foi determinada como 55 kDa.
Considerando essa situação hipotética, julgue os próximos itens.
Apesar de nem sempre ser diretamente acoplada à cromatografia, a espectrometria de massa com ionização por desorção a laser é suficiente para a determinação de massa molecular da enzima, como a descrita na situação em análise.
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Em um projeto de prospecção de fungos com o objetivo de produção enzimática, obteve-se uma condição de cultivo adequada ao aumento de secreção da enzima de interesse. Foram utilizados métodos de análise para identificação e quantificação de tal enzima no meio de cultivo. A identificação foi feita por digestão da enzima e sequenciamento dos peptídios, mediante espectrometria de massa. A massa molecular média da enzima foi determinada como 55 kDa.
Considerando essa situação hipotética, julgue os próximos itens.
A espectrometria de massa do meio de cultivo, em sistema de ionização por eletropulverização e analisador do tipo armadilha de íons, permite a análise elementar do meio de cultivo, com determinação da proporção entre carbono, nitrogênio e enxofre.
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Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue os itens a seguir.
Por se tratar de um extrato vegetal natural, é dispensável o uso de equipamento de proteção individual (EPI) em sua manipulação inicial.
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Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue os itens a seguir.
A cromatografia de troca iônica é adequada ao processo de purificação e separará a enzima de outros componentes com base em sua carga líquida em uma solução.
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Em um projeto de prospecção de fungos com o objetivo de produção enzimática, obteve-se uma condição de cultivo adequada ao aumento de secreção da enzima de interesse. Foram utilizados métodos de análise para identificação e quantificação de tal enzima no meio de cultivo. A identificação foi feita por digestão da enzima e sequenciamento dos peptídios, mediante espectrometria de massa. A massa molecular média da enzima foi determinada como 55 kDa.
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A digestão da enzima para identificação por LCMS deve ser feita utilizando-se aminopeptidase, que é vantajosa em relação a outras proteases por produzir a grande maioria dos peptídios com radicais polares no C-terminal.
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Em um projeto de prospecção de fungos com o objetivo de produção enzimática, obteve-se uma condição de cultivo adequada ao aumento de secreção da enzima de interesse. Foram utilizados métodos de análise para identificação e quantificação de tal enzima no meio de cultivo. A identificação foi feita por digestão da enzima e sequenciamento dos peptídios, mediante espectrometria de massa. A massa molecular média da enzima foi determinada como 55 kDa.
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O preparo de 100 mL de um solvente cromatográfico composto por 20% de acetonitrila e 1% de ácido fórmico em água deve ser feito em capela de exaustão, adicionando-se 20 mL de acetonitrila e 1 mL de ácido fórmico a 70 mL água e, depois, ajustando-se o volume para 100 mL com água.
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Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
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É recomendado o uso de inibidores reversíveis de proteases durante o processo de extração e purificação.
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Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue os itens a seguir.
O uso de eletroforese em gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio é adequado à purificação desejada.
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Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue os itens a seguir.
Se for usada cromatografia de exclusão molecular, deve-se separar o extrato da resina por centrifugação branda, mantendo-se a fração ativa no sobrenadante.
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