Um grupo de pesquisadores está desenvolvendo um vetor de expressão para a produção de uma enzima em células de levedura, e eles observam que a enzima recombinante é expressa, mas em níveis subótimos. Qual abordagem eles devem adotar para otimizar a expressão da enzima?

Estudos da expressão de proteínas têm demonstrado que a escolha de um promotor ineficiente para o experimento limita a capacidade das células de expressar o produto desejado, mesmo que outras condições experimentais estejam otimizadas. Durante a construção de um vetor de expressão, um(a) cientista decide incluir um tag de epítopo na extremidade C-terminal da proteína recombinante, para facilitar a purificação e a detecção. Após a transfecção e a expressão do gene, verifica que a proteína recombinante está presente em níveis muito baixos. A causa desse problema é:

A cultura de células de inseto tem ganhado destaque como hospedeiro eucariótico para expressão de produtos gênicos recombinantes, devido a suas várias vantagens em relação aos sistemas baseados em células de mamíferos. As células de inseto dispensam a necessidade de incubação com CO₂ e a adição de soro fetal bovino ao meio de cultura, além de eliminarem o risco de contaminação humana. Para otimizar a expressão de produtos recombinantes, a escolha do sistema de expressão é crucial. O sistema vetor de expressão baculovírus, que utiliza linhagem celular selvagem e baculovírus recombinante, é uma opção eficiente. Nesse sistema, o gene de interesse é inserido no DNA viral, permitindo que as células de inseto infectadas repliquem o vírus e expressem a proteína codificada, sem integração do gene ao DNA celular.

Para esse tipo de sistema, qual linhagem celular é diretamente utilizada?

A atividade transcricional de um promotor específico em células de mamífero foi investigada. Para tanto, clonou- se um gene repórter em um vetor de expressão e realizou-se a transfecção nas células. Observou-se que a expressão do gene repórter foi muito baixa. Sabendo que elementos amplificadores são conhecidos por aumentar significativamente a transcrição de genes ao interagirem com promotores e melhorarem a eficiência da transcrição, qual procedimento resolve esse problema?

Uma proteína recombinante em células de mamífero está sendo construída utilizando-se um vetor de expressão. Foram escolhidos um promotor forte e um sinal de poliadenilação adequado. No entanto, após a transfecção, o pesquisador observa que a proteína recombinante não está sendo expressa. Assinale a alternativa que corretamente explica o motivo dessa falha na expressão.

Ao realizar um experimento de clonagem gênica, um(a) pesquisador(a) percebe que a taxa de transformação das bactérias com o plasmídeo recombinante é muito baixa, então decide modificar alguns parâmetros para melhorar a eficiência. Para atingir essa eficiência, o(a) pesquisador(a)

Durante a clonagem de um gene humano em um vetor bacteriano, são obtidas colônias transformadas, mas o gene de interesse não é expresso; e verifica-se que a sequência do gene está intacta no plasmídeo. A causa mais provável para a falta de expressão do gene é:

Um(a) estagiário(a) em biologia molecular está tentando clonar um gene de interesse em um vetor de expressão. Após várias tentativas, não consegue obter colônias positivas com o gene clonado, então decide sequenciar o vetor após a digestão com as enzimas de restrição. A análise revela que os sítios de restrição do vetor não foram cortados. Assinale a alternativa que apresenta corretamente a explicação da causa mais provável desse problema.

Em um experimento de clonagem, um(a) cientista utiliza um vetor contendo um gene de resistência a antibiótico e um sítio de clonagem múltiplo (MCS). Após transformar as bactérias com o vetor recombinante, o cientista plaqueia as células em um meio contendo o antibiótico apropriado. Muitas colônias crescem, mas poucas contêm o inserto desejado. Assinale a alternativa que apresenta a possível causa para a baixa taxa de obtenção de colônias com o inserto.

Um(a) pesquisador(a) está realizando um experimento de clonagem de um gene específico em um plasmídeo vetor. Após a digestão do DNA genômico e do vetor com as mesmas enzimas de restrição, o(a) pesquisador(a) realiza a reação de ligação e transforma células competentes com o produto. No entanto, após a cultura, não são encontradas colônias contendo o inserto desejado. Considerando que o objetivo é identificar a causa mais provável para a ausência de colônias com o inserto, qual das seguintes situações pode ser a causa principal?