O uso do método da fosfatase alcalina como segunda marcação tem a vantagem de evitar a reatividade cruzada, que pode ocorrer quando dois procedimentos de imunoperoxidase são utilizados em conjunto.

Dupla imunomarcação com o método de fosfatase alcalina pode produzir excelente contraste com uso do Fast red como cromógeno.

New fuchsin é um cromógeno que produz a cor vermelha e pode ser utilizado com o método da fosfatase alcalina.

Os sistemas de detecção, com base em polímeros, foram introduzidos há alguns anos, na prática imuno-histoquímica com o objetivo de simplificação das múltiplas etapas, produzindo protocolos mais curtos com a vantagem de melhorar a sensibilidade de detecção.

Uma grande vantagem dos sistemas poliméricos de detecção é que eles eliminam o problema da biotina endógena por evitar o anticorpo secundário biotinilado.

No sistema EnVision, inicialmente, o tecido é incubado com o anticorpo primário, seguido pelo conjugado polimérico.

Quanto mais enzimas HRP (horseradish) no polímero, mais cromógeno diaminobenzidina (DAB) é ativado, resultando em uma imunomarcação mais sensível e mais visível.

Nos sistemas poliméricos de imunomarcação, o bloqueio da biotina é necessário.

Os controles de reações imuno-histoquímica podem ser internos e/ou externos.

A parafina utilizada no processamento tecidual não deve exceder 60°C.