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O bloqueio dos sítios inespecíficos é uma etapa importante e deve ser realizada antes da incubação do anticorpo primário.
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O formaldeído a 10% não tamponado é preferível ao formaldeído tamponado a 10%, pois produz menos ligações cruzadas.
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Banho-maria e micro-ondas não representam métodos de recuperação antigênica pelo método físico-químico por calor.
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As soluções de tampão fosfato (PBS) ou tampão tris (TBS) podem ser também utilizadas para recobrir os cortes entre as passagens de um passo para outro.
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Qualquer coloração que não é resultado da reação antígeno/anticorpo é denominada de coloração de fundo específica.
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