O tempo de incubação depende da sensibilidade e concentração do anticorpo primário, bem como da qualidade do tecido.

A incubação das lâminas em uma câmara úmida é aconselhável em qualquer temperatura, pois, se uma lâmina tratada com o anticorpo primário ficar seca, tem-se como resultado uma coloração de fundo.

A remoção incompleta de parafina não representa uma causa de coloração de fundo.

A silanização das lâminas é uma forma de preparo das lâminas antes dos cortes serem submetidos à técnica imuno-histoquímica.

A contracoloração com eosina é frequentemente utilizada na técnica imuno-histoquímica.

Tris.HCl (tris(hydroxymethyl)aminomethane) é uma das soluções-tampão rotineiramente usadas na técnica imuno-histoquímica.

Tampão citrato pH 6.0 jamais pode ser utilizado na técnica imuno-histoquímica.

A omissão do anticorpo primário, a substituição do anticorpo primário por um soro não imune, a substituição do anticorpo primário por outro anticorpo dirigido para um antígeno diverso ao que está em estudo e a inclusão da vimentina no painel representam controles importantes da reação imuno-histoquímica.

A desparafinização não deve ser realizada no tecido que passará pela reação imuno-histoquímica.

Deve-se iniciar a otimização de um anticorpo com base na experiência, sem levar em consideração o que o fabricante recomenda.