Um técnico de laboratório tem que preparar 1 L de solução de NaCl a 100mM a partir de um estoque de NaCl 1N.

Para preparar essa solução, ele precisará pipetar da solução estoque, em mL, a seguinte quantidade:

O vermelho de fenol ao mudar da cor amarela para a vermelha, passa a refletir luz visível da forma que se segue:

Observe a figura abaixo:

A fórmula química do vermelho de fenol na forma que aparece na figura é:

O vermelho de fenol é amplamente utilizado como indicador de pH em meios de cultura de células. Isso porque ele pode perder prótons em pH básico (acima de 8) e assim adquirir uma coloração arroxeada. Em pH ácido (abaixo de 6), apresenta cor amarelada, e em pHs intermediários, apresenta gradações entre amarelo e roxo, passando por vermelho.

Em meios de cultura que serviriam para a grande maioria das células, espera-se que o pH e a cor do vermelho de fenol sejam, respectivamente:

No cultivo de células, é fundamental evitar a contaminação por outros tipos celulares como bactérias e fungos. Para isso é importante manter-se estéril todo o material que vai entrar em contato com as células a serem cultivadas.

Apesar de todo o cuidado, a fase de manipulação das culturas, como por exemplo, as trocas de meio, devem ser realizadas num ambiente também estéril com um fluxo laminar. Mesmo trabalhando-se no fluxo, é interessante sempre que possível flambar as superfícies de pipetas e materiais cirúrgicos.

Para se processar a flambagem é necessário o uso de:

O ácido desoxirribonucleico – DNA, possui características estruturais e químicas que justificam muitas de suas propriedades, como por exemplo, de migrar em um gel frente a uma corrente elétrica.

O DNA é chamado de ácido porque possui:

Em seguida à obtenção do gel de agarose, o técnico realiza uma hibridização com sonda marcada com !$ \alpha !$-³²P-ATP. No seu decaimento, o fósforo 32 perde um elétron e tem meia vida de cerca de 14 dias.

Para tomar os cuidados em relação à manipulação desse material radioativo, é preciso que o técnico saiba que o fósforo 32 emite:

Em seguida à inserção do DNA plasmidial em bactérias, o técnico coleta algumas colônias em placas de ágar e, após crescimento em meio líquido, isola novamente os DNAs correspondentes a cada colônia (numeradas de I a V). Para confirmar possuir o DNA correto, realiza uma digestão com enzimas de restrição para remoção do inserto dos plasmídeos correspondentes a cada colônia e em seguida corre um gel de agarose, como mostrado abaixo.

(PM: padrão de peso molecular)

Ele nota que o produto da digestão contida na faixa V é bem diferente dos demais. Isso porque o inserto em V tem:

Um técnico de laboratório deseja produzir novas cópias de um plasmídeo e para isso insere-o em bactérias competentes.

Com esse procedimento de inserção do plasmídeo na bactéria, tem-se a seguinte ocorrência:

Em 1953 Francis Crick e James Watson publicaram a estrutura do DNA que é aceita até hoje. O que poucos sabem é que no mesmo ano Linus Pauling publicou também a sua versão do que seria a estrutura do DNA:

Fonte: “A proposed structure for the nucleic acids.” (1953)

Proc. Natl. Acad. Sci. 39: 84-97

As esferas mais escuras no meio (linha pontilhada) são átomos de fósforo envolvidos por quatro átomos de oxigênio, seguidos de anéis purínicos.

A estrutura do DNA de Watson & Crick difere da de Pauling, porque, na primeira, observa-se a seguinte ocorrência: